Люис рпга тест

Производитель: Ниармедик плюс (Россия)
РУ: лс-001686
Отпуск из аптек: по рецепту
ФТГ: Мибп - диагностикум
EphMRA: T2X9прочие диагностические тесты
Форма выпуска: набор диагностический
Тип: Лекарственное средство
Состав
Условия и сроки хранения

Состав

ингредиент
количество
описание
диагностикум
8,5 мл
(1 флакон-10 мл)
 в прозрачном фл.
 с пластмассовой
 крышечкой
 красного
 цвета.
Суспензия формалинизованих эритроцитов цыпленка, сенсибилизированных антигеном Treponema pallidum . Суспензия красно-коричневого цвета, при хранении разделяется на 2 фракции: верхнюю - прозрачную светло-желтую жидкость, нижнюю - темно-бурый осадок эритроцитов. Содержит консервант - азид натрия в концентрации 0,1%.
контрольные эритроциты
8,5 мл
(1 флакон-10 мл)
 в прозрачном фл.
 с пластмассовой
 крышечкой
 белого цвета.
Формалинизовани эритроциты цыпленка, а не сенсибилизированные антигеном Treponema pallidum . Суспензия красно-коричневого цвета, при хранении разделяется на 2 фракции: верхнюю - прозрачную светло-желтую жидкость, нижнюю - темно-бурый осадок эритроцитов. Содержит консервант -азид натрия в концентрации 0,1%.
Положительный контрольный образец (К +)
0,5 мл
(1 флакон-
 3 мл) в
 флаконе с
 кришеч-
 кой черво-
 ного
 цвета
Сыворотка (или плазма) крови человека с клинически и серологически подтвержденным диагнозом сифилиса, содержащий антитела к антигенам Treponema pallidum , и не содержит антител к ВИЧ-1,2, вируса гепатита С, а также НВsАg. Содержит консервант - азид натрия в концентрации 0,1%. В РПГА с диагностикумом демонстрирует наличие антител в титре не менее 1: 1280. Прозрачная жидкость желтоватого цвета.
 
Отрицательный контрольный образец (К)
0,5 мл
(1 флакон-
3 мл) в
 флаконе с
 кришеч-
кой белого
цвета
Сыворотка (или плазма) здорового человека, не содержит антител к антигенам Treponema pallidum , ВИЧ-1,2 и вируса гепатита С, а также НВsАg. Содержит консервант - азид натрия в концентрации 0,1%. В РПГА с диагностикумом показывает отсутствие антител к антигенам Treponema pallidum . Прозрачная жидкость желтоватого цвета.
 
Буфер для разведения
20 мл
(1 флакон-
20 мл)
в флаконе с
кришеч-кой белого
цвета
Прозрачная жидкость желто-оранжевого цвета в стеклянном флаконе объемом 20 мл. Содержит консервант - азид натрия в концентрации 0,1%.
 
Планшет для микро-титрования
2 шт.
Планшет гемаглютинацийний неразборный с U-образными лунками, в полиэтиленовом пакете с замком.
 

3. МЕРЫ

  • При работе с образцами сывороток (или плазмой) крови пациентов следует обращаться как с потенциально инфекционными объектами, соблюдая меры предосторожности (СП 3.3.2.1288-03).
  • Запрещается модифицировать процедуру проведения анализа, сокращать продолжительность времени постановки реакции, использовать реагенты других производителей, а также реагенты других серий набора «Льюис РПГА».
  • Необходимо предусмотреть меры по предотвращению перекрестной контаминации реагентов.
  • Компоненты «Льюис РПГА теста» содержат 0,1% азида натрия в качестве консерванта, который может быть токсичен при попадании внутрь.

4. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА

1. Дозаторы механические со сменными наконечниками, с диапазоном дозирования жидкости 10 -100 мкл, 100-1000 мкл.

2. Таймер.

3. Холодильник.

4. Перчатки латексные.

5. ОБРАЗЦЫ ДЛЯ АНАЛИЗА

Для исследования используют сыворотку (или плазму) крови человека.

Для получения сыворотки свижовзяту кровь, полученную от пациента, инкубируют в термостате при температуре 37 ° С в течение 30-60 мин, выдерживают при температуре 4 ° С в течение 1,5 ч, после чего центрифугируют в течение 10 мин со скоростью 1,5 тыс. Об / мин. Не используют образцы со следами бактериального прорасту, гемолизированные или хилезный.

Допускается хранение сывороток при температуре от 2 до 8 ° С в течение 5 дней или при минус 20 ° С не более 6 недель.

6. ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА

6.1. подготовка реагентов

Все реагенты и образцы до начала исследования выдерживают в течение 30 мин при температуре от 18 до 25 ° С.

Перед использованием диагностикум и контрольные эритроциты (флакон 1 и флакон 2) встряхивают до образования гомогенной суспензии. Не допускается подсыхания диагностикума и контрольных эритроцитов на стенках флаконов в процессе хранения набора.

Для постановки реакции применяют планшеты для микротитрования с U-образными лунками.

Примечание: Реакцию проводят только на горизонтальной поверхности, не допуская близости приборов, создающих вибрацию.

6.2. проведение анализа

ВНИМАНИЕ: реакцию с К + и К- ставят так же, как и с исследуемым образцом сыворотки крови.

качественный метод

1) Разведение испытанной сыворотки готовят непосредственно в лунках планшета для микротитрования. Для этого в лунки вносят буфер для разведения (флакон 5) по следующей схеме:

Ряд 1 (вертикальный) 25 мкл

Ряд 2 (вертикальный) 100 мкл

Ряды 3 и 4 (вертикальные) 25 мкл

Вносят 25 мкл сыворотки, которая будет исследоваться, в лунку ряда 1 (получают разведение сыворотки 1: 2). Перемешивают содержимое лунки ряда 1 и переносят 25 мкл в лунку ряда 2 (получают разведение сыворотки 1:10). Перемешивают содержимое лунки ряда 2 и переносят по 25 мкл в лунку ряда 3 и в лунку ряда 4, перемешивают и удаляют по 25 мкл; лунки рядов 3 и 4, содержащих по 25 мкл разведения 1:20 исследуемой сыворотки, используют для постановки реакции.

Разведение сыворотки 1:20 можно приготовить в лунке ряда 1. Для этого в 190 мкл буфера для разведения (флакон 5) добавляют 10 мкл сыворотки, перемешивают, после чего из этой лунки отбирают по 25 мкл и переносят в лунки рядов 2 и 3. В этом случае для постановки реакции используют лунки 2 и 3 рядов, содержащих по 25 мкл разведения исследуемой сыворотки 1:20.

Разведение выходных сывороток 1:20 допускается делать в Микропробирки, например, добавить 10 мкл сыворотки до 190 мкл буфера для разведения (флакон 5) и перемешать. Для постановки реакции в две лунки планшета для микротитрования вносят по 25 мкл приготовленного разведения исследуемой сыворотки.

2) Добавляют по 75 мкл суспензии диагностикума (флакон 1) в лунки 4-го ряда и по 75 мкл суспензии контрольных эритроцитов (флакон 2) в лунки 3-го ряда. Конечное разведение исследуемой сыворотки составляет 1:80. Необходимо поддерживать сохранение однородности суспензий во флаконах, из которых осуществляется розкапування. При образовании осадка или расслаивания, которое намечается, тщательно перемешивают содержимое флакона.

3) В каждую постановку обязательно включают положительный контроль (К +) (флакон 3) и отрицательный контроль (К) (флакон 4), входящих в состав набора. Реакцию с контрольными образцами ставят аналогично.

4) После розкапування реагентов осторожно покачивают планшет (в течение 1 мин) вручную, чтобы перемешать содержимое лунок. Закрывают планшет и инкубируют его 45-60 мин при комнатной температуре. К учету результатов планшет должен быть неподвижным! Планшет можно оставить на ночь.

5) Учитывают результаты агглютинации.

количественный метод

После определения антител в образце сыворотки (или плазме) крови качественным методом на следующем этапе может быть проведен количественный анализ положительных образцов. Исходное разведения сыворотки для количественного определения - 1:80. Схема постановки реакции такова:

1) Вносят по 25 мкл буфера для разведения (флакон 5) в лунки вертикальных рядов 1-8 (количество горизонтальных рядов должно соответствовать количеству образцов) планшета для количественного анализа.

2) Вносят по 25 мкл буфера для разведения (флакон 5) в лунки вертикальных рядов 1-8 для титрования положительного контроля (К +) (флакон 3).

3) Вносят по 25 мкл буфера для разведения (флакон 3) в две лунки планшета для постановки реакции с отрицательным контролем (К) (флакон 4).

4) Вносят по 25 мкл образца с соответствующей лунки ряда 2 (разведение сыворотки 1:10) планшета, который был использован для постановки качественного метода, в лунку вертикального ряда 1 и 2 планшета, который использовался для количественного метода, перемешивают содержимое лунок. С лунки 1 удаляют 25 мкл.

5) С лунки вертикального ряда 2 после перемешивания содержимого переносят 25 мкл в лунку 3. Готовят последовательные двукратные разведения образца в лунках рядов 3-8 (разведение образцов сыворотки от 1:20 до 1: 1280). С последней лунки (стр 8) отбирают избыточные 25 мкл и удаляют.

6) Для постановки реакции с отрицательным контролем в две лунки, содержащие по 25 мкл буфера для разведения (см. П. 1), добавляют по 25 мкл разведения К- 1:10, перемешивают и удаляют по 25 мкл.

7) Вносят по 75 мкл контрольных эритроцитов (флакон 2) в лунки вертикального ряда 1 и в одну из лунок с К- (конечное разведение исследуемой сыворотки - 1:80).

8) Вносят по 75 мкл диагностикума (флакон 1) в лунки рядов 2-8, а также во вторую лунку с отрицательным контролем. Конечные разведения исследуемых образцов сыворотки (или плазмы) крови и К + от 1:80 до 1: 5120.

9) перемешивают содержимое лунок планшета осторожным покачиванием в течение 1 мин вручную. Закрывают крышкой и оставляют на 45-60 мин при температуре от 18 до 25 ° С. К учету результатов планшет должен быть неподвижным! Планшет можно оставить на ночь.

10) Учитывают результаты реакции.

7. РЕГИСТРАЦИЯ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

7.1. Общие сведения при учете результатов.

1) Учет результатов осуществляют визуально по следующей шкале:

4+ - ровный слой агглютинированными эритроцитов по всей поверхности дна лунки ( «зонтик»), иногда со складчатым краем;

3+ - то же, что и 4+, но с намеченным кольцом по периферии «зонтика»;

2+ - эритроциты образуют широкое кольцо с выраженным просветом в центре;

1+ - эритроциты образуют более плотное кольцо меньшего размера с небольшим просветом в центре;

± - компактный осадок эритроцитов со слабо заметным просветом в центре;

  • - компактный осадок эритроцитов в центре лунки ( «пуговка»).

Примечание:

1) Следует обращать внимание на возможный нестандартный вид реакции. Загнутые или неровные края «зонтика» могут быть результатом избытка антител (эффект «Прозона»).

2) В лунках с положительным и отрицательным контролем, а также в лунках с исследуемыми образцами, при добавлении контрольных эритроцитов агглютинация должна отсутствовать.

3) В лунках с отрицательным контролем и диагностикумом агглютинация должна отсутствовать.

4) Агглютинация эритроцитов диагностикума при отсутствии агглютинации контрольных эритроцитов свидетельствует о наличии в сыворотке крови специфических антител к Treponema pallidum . Считывания результатов и их интерпретацию осуществляют по сравнению с контролями.

5) Агглютинация контрольных эритроцитов и агглютинация диагностикума при тестировании пробы свидетельствуют о наличии антиэритроцитарных антител. В этом случае тест повторяют. Если при повторной постановке реакции с этой пробой вновь наблюдают агглютинацию не только диагностикума, но и контрольных эритроцитов, то тест проводят после абсорбции исследуемой сыворотки. Для этого до 10 мкл исходной исследуемой сыворотки добавляют 190 мкл контрольных эритроцитов (флакон 2), перемешивают и инкубируют при комнатной температуре в течение 30 мин. Центрифугируют 3 мин при 2000 об / мин. Супернатант (разведение сыворотки 1:20) используют для постановки реакции с суспензией диагностикума и контрольных эритроцитов по стандартному протоколу (25 мкл супернатанта смешивают с 75 мкл диагностикума, а 25 мкл супернатанта - с 75 мкл контрольных эритроцитов).

7.2. Интерпретация результатов при качественном методе.

ПОЗИТИВНЫМИ считаются образцы, реагирующие на 4+ и 3+;

Слабоположительного считаются образцы, реагирующие на 2+;

Сомнительно считаются образцы, реагирующие на 1+;

НЕГАТИВНЫМИ считаются образцы, реагирующие на ± и -.

При постановке реакции качественным методом в случае получения слабоположительного и / или сомнительных результатов рекомендуется протестировать образец повторно. При получении аналогичного результата рекомендуется через некоторое время повторное взятие крови и проведения повторного анализа.

Примечание: Все пробы дают слабоположительные и сомнительные результаты, рекомендуется дополнительно исследовать другими методами.

7.3. Интерпретация результатов при количественном методе.

При количественном методе постановки реакции титром положительной сыворотки считается максимальное разведение, которое дает результат «1+». При количественном методе в положительном контроле (К +) (флакон 3) должны определяться антитела к Treponema pallidum в титре не ниже 1: 1280.

8. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

Хранение в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8 ° С в недоступном для детей месте. ХРАНИТЬ ТОЛЬКО ВЕРТИКАЛЬНО.

Транспортировка в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8 ° С в условиях, исключающих замораживание. Допускается кратковременное (не более 3 суток) транспортировка при температуре от 9 до 25 ° С.

Условия и сроки хранения

Срок годности 18 месяцев. Препарат с истекшим сроком годности закончился, применению не подлежит.

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.